HepDART 2019:诺华研究人员识别出一个有助HBsAg产生的人类宿主因子

慢性乙型肝炎病毒感染的标志是存在高循环水平的非感染性小脂质HBV表面抗原(HBsAg)囊泡。目前的研究认为持续的 HBsAg 消失是慢性乙型肝炎治疗的理想终点。 诺华生物医学研究所研究人员先前已经报道了通过靶向末端核苷酸转移酶蛋白4A和4B(TENT4A和TENT4B)来抑制 HBsAg 表达的新型小分子RG7834。

在本次 HepDART 2019 大会上,研究人员描述了一个全基因组的 CRISPR 筛查鉴定 HBsAg 表达所需的其他潜在的新型宿主因子,并进一步了解RG7834的机制。

将覆盖19 050个蛋白质编码基因的选择性慢病毒gRNA文库转导到表达 Cas9 和整合的1.1mer HBV基因组的HepG2细胞系中。在选择好后,将细胞用 RG7834(EC20 和EC80)或溶媒(DMSO)处理,并进行 FACS 分选,以检测细胞内 HBsAg 表达水平的高低。通过下一代测序(NGS)技术在分选的细胞群体中对gRNA进行定量,并在每个比较组之间进行统计富集分析,以鉴定候选基因命中(gene hits)。

研究人员报告了多达60多个基因参与HBsAg的调控,并确定了 RG7834 的新功效靶标,包括含14个(ZCCHC14)蛋白的锌指CCHC型。研究显示ZCCHC14与TENT4A / B一起在转录后调控元件位点内结合HBV RNA,并通过HBV RNA拖尾稳定HBsAg表达。

综上,全基因组CRISPR筛选为确定控制HBsAg表达的新基因和途径提供了强有力的策略。 此外,研究人员展示了这种无偏见的方法作为剖析HBsAg表达抑制剂潜在机制的工具。 特别是,研究人员提供了ZCCHC14在通过TENT4A / B作为非常规TRAMP样复合体的一部分通过HBV RNA拖尾增强HBsAg mRNA的稳定性中发挥作用的第一个证据。 这些结果提示,潜在新的治疗靶标可中断慢乙肝中的HBV复制和基因表达。(更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号)!

信息来源:A genome-wide CRISPR screen identifies ZCCHC14 as a host factor required for hepatitis B surface antigen production


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