【期刊导读】大、中HBV表面蛋白可作为HBV感染分期诊断的生物标志物

编者按
慢乙肝的临床挑战之一是确定患者开始抗病毒治疗的最佳时机（相关链接）。目前的诊断标准未能准确识别区分这些患者，导致部分患者错过最佳治疗时机。因此，进一步的研究对于提高我们对疾病的了解并最终开发出与慢性HBV感染相关的诊断和预后标志物至关重要。已有研究表明，大HBV表面蛋白（LHB）和中HBV表面蛋白（MHB）在病毒侵袭、复制和促进癌症发生中发挥重要作用，可作为新的HBV感染的诊断生物标志物。

近期，福建医科大学附属第一医院的刘灿教授和欧启水教授团队在Clinica Chimica Acta上发表了相关研究，结果表明：血清MHB水平是区分HBeAg阳性慢性HBV感染和HBeAg阳性慢乙肝的可靠标志物，而LHB水平是区分HBeAg阴性慢性HBV感染和HBeAg阴性慢乙肝的最佳标志物；LHB、MHB及其与总HBsAg的相对比例是影响慢乙肝疾病进展的重要因素。

研究方法
纳入217例2020年9月至2023年9月期间就诊于福建医科大学附属第一医院的HBV感染者，采用ELISA对其血清样本进行LHB和MHB的定量分析。其中HBeAg阳性慢性HBV感染（I期）患者40例、HBeAg阳性慢乙肝（II期）患者34例、HBeAg阴性慢性HBV感染（III期）患者21例、HBeAg阴性慢乙肝（IV期）患者32例、HBeAg+/HBeAb+的HBV感染者21例、肝硬化患者29例、肝癌患者40例。*HBV相关肝硬化、慢性HBV感染和慢乙肝的诊断均遵循《中国慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》，肝癌的诊断严格遵循EASL肝癌临床实践指南（2018年）。

研究结果

01、LHB、MHB及其占HBsAg的比例与HBV血清标志物存在显著相关性

为了消除潜在的混杂因素，同时分析了127例未接受治疗的慢性HBV感染患者，以排除诸如抗病毒治疗等可能影响HBV DNA水平降低和肝脏炎症消退的因素。

结果显示，血清中LHB、LHB/HBsAg及MHB与总HBsAg、HBV DNA及HBeAg呈显著正相关（P < 0.0001）。而MHB/HBsAg与总HbsAg及HBV DNA呈显著负相关（P < 0.001）。同时，包膜蛋白和肝功能标志物之间不存在显著相关性。综上所述，HBV包膜蛋白及其占HBsAg的比例具有作为病毒复制标志物的潜力。

包膜蛋白与HBV标志物之间的相关性

02、慢乙肝患者的LHB水平显著高于肝硬化和肝癌患者

与II期患者相比，I期患者的LHB水平显著升高（图A），而LHB/HBsAg没有显著差异（图B）。III期患者的LHB水平和LHB/HBsAg均显著低于IV期患者（图A - B）。

基于血清HBeAg状态的分析显示，随着HBeAg的清除和Anti-HBe的出现，血清LHB和LHB/HBsAg水平逐渐下降（图C - D）。基于不同HBV相关肝脏疾病的分析显示，慢乙肝患者的LHB水平显著高于肝硬化和肝癌患者（图E）。此外，慢乙肝患者的LHB/ HBsAg比值显著高于肝癌患者（图F）。

不同阶段HBV感染者的LHB水平和LHB/HBsAg相对比例

03、慢乙肝患者的MHB水平显著高于肝硬化和肝癌患者

与在LHB中观察到的结果类似，I期患者的MHB水平较II期患者明显升高，但III期患者较II期患者明显下降（图A）。此外，与IV期相比，III期患者的MHB/HBsAg水平显著更高（图B）。这一观察结果与LHB的趋势相矛盾。HBeAg的清除和Anti-HBe的出现伴随着MHB水平的显著下降（图C），但MHB/HBsAg表现出先下降后上升的趋势（图D）。基于不同HBV相关肝脏疾病的分析显示，慢乙肝患者的MHB水平显著高于肝硬化和肝癌患者（图E）。此外，慢乙肝患者的MHB/HBsAg比值显著高于肝硬化患者（图F）。总体而言，在HBV相关肝病的不同阶段，MHB水平和MHB/HBsAg比值存在显著差异。

不同阶段HBV感染者的MHB水平和MHB/HBsAg相对比例

04、血清LHB和MHB水平在HBV感染分期的诊断中具有较高应用价值

研究结果表明，血清MHB水平是区分I期和II期最可靠的标志物（AUC = 0.7176，P = 0.0013）。临界值为5.04 log10 ng/mL时，在HBeAg阳性患者中准确识别慢乙肝患者的敏感性为55.88%，特异性为87.5%（图A），阳性预测值为79.17%，阴性预测值为70.00%。进一步的研究显示，血清LHB水平是区分III期和IV期的最佳标志物（AUC = 0.8214，P < 0.0001）。临界值为2.33 log10 IU/mL时，在HBeAg阴性患者中准确识别慢乙肝患者的敏感性为71.88%，特异性为80.95%（图B），阳性预测值为85.19%，阴性预测值为65.38%。综上所述，血清LHB和MHB的应用对HBV感染阶段的精确分类做出重要贡献，因此有望成为一种新的诊断标志物。

不同HBV感染时期包膜蛋白的ROC分析（A）在HBeAg阳性患者中识别HBeAg阳性慢乙肝患者的诊断效果；（B）在HBeAg阴性患者中识别HBeAg阴性慢乙肝患者的诊断效果。

05、LHB、MHB及其占HBsAg的比例是影响慢乙肝疾病进展的重要因素

使用单变量logistic回归来分析可能影响慢乙肝向肝硬化或肝癌进展的潜在因素。结果表明，年龄、LHB、MHB、LHB/HBsAg和MHB/HBsAg是影响疾病进展的重要因素。

对相关因素进行多因素logistic回归分析，为了防止多重共线性，最终将LHB/HBsAg（排除HBsAg和LHB）和MHB/HBsAg（排除HBsAg和MHB）纳入分析。结果表明，年龄> 37岁和MHB/HBsAg < 1.047是慢乙肝向肝硬化进展的独立因素（图A），而年龄> 45岁和MHB/HBsAg < 1.043是慢乙肝向肝癌进展的独立因素（图B）。

慢乙肝进展为肝硬化或肝癌的相关危险因素的多因素logistic回归分析（A）慢乙肝进展为肝硬化的独立因素分析；（B）慢乙肝进展为肝癌的独立因素分析。

肝霖君有话说

HBV慢性感染是全球范围内慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要原因。虽然目前指南尚未推荐免疫耐受期和非活动性HBsAg携带人群抗病毒治疗，但已有多项研究表明这部分人群仍存在疾病进展风险（相关链接一、二）。因此，及时并准确地识别需要抗病毒治疗的患者尤为重要。

本研究表明，血清MHB和LHB水平可用于区分HBV感染的自然史时期，且MHB/HBsAg比例是影响慢乙肝向肝硬化或肝癌进展的独立因素，有利于更准确地识别出疾病进展风险较高的人群。此前也有研究表明，HBsAg的组成可预测HBeAg阳性慢乙肝患者（相关链接）及非活动性HBsAg携带者（相关链接）的HBsAg清除。期待这些研究成果可以早日真正运用于临床，造福更多慢乙肝患者。

参考文献：

Zeng Y, Zhu C, Huang E, et al. Detection of serum large and middle hepatitis B virus surface proteins: A novel potential diagnostic and prognostic biomarker for chronic hepatitis B[J]. Clin Chim Acta, 2024, 553: 117739.