【期刊导读】疗效预测新指标：miR-548c-3p靶向TRIM22，降低PEG IFNα在HBeAg阳性慢乙肝患者中的疗效

编者按
慢乙肝患者接受聚乙二醇干扰素α（PEG IFNα）治疗的临床疗效存在显著个体差异，更好地了解与PEG IFNα疗效相关的病毒学及宿主因素可能有助于提高疗效，实现更好的个体化治疗。

近期，来自福建医科大学附属第一医院的一项研究发现，三基序蛋白（TRIM）家族的TRIM22及其负调控因子miR-548c-3p可能是影响PEG IFNα疗效的重要因素。研究表明TRIM22在PEG IFNα治疗应答的患者中呈高表达，且与HBV DNA和HBeAg水平呈负相关。TRIM22过表达显著提高了NOD2/NF-κB通路中炎性细胞因子IL-1β和IL-8的水平，增强PEG IFNα的抗病毒活性，而miR-548c-3p是TRIM22的关键负调控因子，通过抑制TRIM22表达来降低PEG IFNα治疗HBeAg阳性慢乙肝患者的疗效。

【期刊导读】疗效预测新指标：miR-548c-3p靶向TRIM22，降低PEG IFNα在HBeAg阳性慢乙肝患者中的疗效

研究方法

本研究共纳入56例来自福建医科大学附属第一医院的接受PEG IFNα治疗的HBeAg阳性慢乙肝患者。PEG IFNα治疗48周后，分为完全应答组（CR）和应答不佳组（SR）。CR定义为HBeAg < 1 S/CO，HBV DNA < 500 IU/mL，ALT < 40 U/L，若不符合上述任何一个项则归为SR。

研究首先分析了TRIM22蛋白与HBV标志物之间的相关性，并进行了初步的功能验证，以确定TRIM22对IFNα治疗慢乙肝患者疗效的影响。其次研究发现miR-548c-3p作为候选的miRNA具有与TRIM22基因的3' UTR区域结合的潜力，并分析了miR-548c-3p在慢乙肝患者和细胞实验中是否靶向TRIM22。最后重点研究了miR-548c-3p介导的降低PEG IFNα治疗疗效的分子机制。

研究结果

一、完全应答患者的TRIM22水平更高，并与HBV DNA和HBeAg水平呈负相关

研究发现6个TRIM家族成员（TRIM15、TRIM22、TRIM26、TRIM31、TRIM38和TRIM39）在CR组和SR组间存在多态性，其中SR组的TRIM22水平显著低于CR组，其余5个基因的表达情况相似。

PEG IFNα治疗48周后，两组患者外周血中各TRIM基因的表达水平

分析TRIM22与患者血清常规病毒学或血清学指标如HBV DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平的相关性发现，TRIM22与血清HBV DNA和HBeAg水平呈负相关，提示TRIM22表达升高可能与PEG IFNα的疗效较好有关。

TRIM22转录水平与慢乙肝患者HBV DNA、HBsAg、HBeAg、ALT和AST水平的相关性分析

二、IFNα通过增强TRIM22的表达发挥抗病毒作用

TRIM22是一种干扰素刺激基因（ISG），qPCR和Western Blot结果表明，IFNα诱导HepG2.2.15细胞中TRIM22的表达，且呈时间和剂量依赖性。

IFNα诱导HepG2.2.15细胞中TRIM22呈时间和剂量依赖性表达

相比于对照细胞（phblv-con），过表达TRIM22的细胞（phblv-TRIM22）中HBsAg、HBeAg和HBV DNA的水平显著更低。

在缺乏IFNα作用的情况下，过表达TRIM22细胞中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的水平

与对照组相比，在IFNα（103 IU）作用下敲除TRIM22后HBsAg、HBeAg和HBV DNA的相对水平显著升高。

在IFNα作用下，用shRNA敲除TRIM22后检测各细胞中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的表达水平

IFNα的浓度梯度实验表明，敲除TRIM22对抗HBV病毒疗效的影响更大，表明IFNα通过增强TRIM22的表达发挥抗病毒作用。

敲除TRIM22且使用不同浓度IFNα处理后检测HBV DNA、HBsAg和HBeAg的水平

三、TRIM22过表达增强抗病毒炎性细胞因子IL-1β和IL-8的水平

采用GSE65359数据集分析83例慢乙肝患者肝组织中的差异基因表达情况并识别TRIM22相关的潜在通路，以进一步阐明其功能。基因集富集分析（GSEA）结果显示，免疫清除期患者的TRIM22水平显著高于免疫耐受期。

TRIM22在免疫耐受期和免疫清除期的表达情况

TRIM22与核苷酸结合寡聚化结构域2（NOD2）信号通路的相关分子呈正相关，该信号通路负责激活抗病毒的炎性因子。且过表达TRIM22的HepAD38细胞中的IL-1β和IL-8水平显著更高。

对TRIM22和NOD2通路分子进行热图(B)和KEGG通路分析(C和D)检测过表达TRIM22的细胞中12种细胞因子的水平

四、miR-548c-3p水平与TRIM22呈负相关

明确TRIM22参与IFNα诱导的抗病毒作用后，进一步探索了TRIM22被其负调控因子（如miRNAs）下调后，是否与慢乙肝患者对IFNα治疗的应答不佳有关。使用TargetScan计算程序预测靶向TRIM22 mRNA 3' UTR的候选miRNAs，并鉴测出3种，分别为miR-30a-3p、miR-130b-5p和miR-548c-3p。最终发现在HBeAg阳性慢乙肝患者中，与CR组相比，SR组miR-548c-3p表达升高，且TRIM22下调。

HBeAg阳性慢乙肝患者中SR及CR组患者miRNA的相对表达水平HBeAg阳性慢乙肝患者中SR及CR组患者的TRIM22相对表达水平

Pearson相关分析显示TRIM22与miR-548c-3p表达水平呈显著负相关。

HBeAg阳性慢乙肝患者TRIM22 mRNA与miR-548c-3p的相关性分析(n = 56)

五、miR-548c-3p通过靶向TRIM22 mRNA的3' UTR端下调TRIM22的表达

既往研究表明TRIM22 3' UTR是miR-548c-3p的潜在结合位点。细胞和蛋白实验表明miR-548c-3p抑制了TRIM22的3' UTR的活性，而缺失miR-548c-3p的UTR结合位点的活性无明显变化。同时miR-548c调控内源性TRIM22蛋白表达，即使加入IFNα，miR-548c同样会抑制TRIM22蛋白表达，提示miR-548c-3p通过直接结合其3' UTR抑制TRIM22的表达。

未经IFNα处理（D）或经IFNα处理（E）后，用miR-548c-3p类似物、抑制剂或相应对照质粒转染的HepAD38细胞中TRIM22的表达情况

六、miR-548c-3p通过靶向TRIM22来降低PEG IFNα的疗效

与对照组相比，转染miR-548c-3p后细胞中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平显著升高，表明miR-548c-3p通过抑制TRIM22表达降低了PEG IFNα在慢乙肝患者中的疗效。

用miRNA模拟物或相应的对照质粒转染HepAD38细胞后，经IFNα（103 IU）处理12、24及48小时后检测HBsAg、HBeAg和HBV DNA的水平

潜在应用分析

在HBeAg阳性慢乙肝患者的外周血中，极低的miR-548c-3p可能预示着TRIM22的高表达，可能对PEG IFNα的应答更好。因此TRIM22可以作为鉴定慢乙肝患者IFNα治疗应答的新型外周标志物，而内源性的miR-548c-3p可能是PEG IFNα治疗的潜在调控位点。

miR-548c-3p靶向TRIM22，抑制PEG IFNα在HBeAg阳性慢乙肝患者的疗效示意图

肝霖君有话说

本研究证明PEG IFNα治疗疗效可能与TRIM22有关。在应答组中患者的TRIM22呈高表达，且与HBV DNA、HBeAg呈负相关；TRIM22水平与NOD2/NF-κB信号通路基因的富集呈正相关，TRIM22高表达提高炎性细胞因子IL-1β和IL-8水平。提示TRIM22作为干扰素刺激基因之一，是影响外源性PEG IFNα治疗疗效的重要影响因素，与免疫活化、增强PEG IFNα诱导的抗病毒应答有关。

我们之前有报道研究显示TRIM家族的TRIM38高表达可抑制HBV的复制及基因表达，并通过上调抗病毒蛋白的表达从而增强IFNα的抗病毒作用，治疗过程中较高的TRIM38水平是预测PEG IFNα治疗应答的有效生物标志物（相关链接）。关于影响PEG IFNα治疗疗效的机制研究仍需进一步探索，积累更多证据以指导临床应用。

参考文献：

Lin N, Wang L, Guo Z, et al. miR-548c-3p targets TRIM22 to attenuate the Peg-IFN-α therapeutic efficacy in HBeAg-positive patients with chronic hepatitis B[J]. Antiviral Res. 2023; 213: 105584.

往期内容请点击

【期刊导读】疗效预测新指标TRIM38：聚乙二醇干扰素α可诱导其表达，提升抗病毒疗效

【AASLD2022速递】预测聚乙二醇干扰素α治疗应答的新指标

【期刊导读】HBsAg清除预测新方法——qAnti-HBc联合qHBsAg