编者按:第73届美国肝病研究学会年会(AASLD 2022)于当地时间2022年11月4日 - 8日在美国召开。会议期间披露了多项乙肝新药研究进展,肝霖君精选其中的重要进展与大家分享。

现有的抗HBV药物主要包括核苷和干扰素α,两者经有效联合可帮助慢乙肝患者实现临床治愈,但由于核苷和干扰素α均不直接靶向cccDNA,cccDNA无法完全清除,慢乙肝患者的完全治愈至今尚未实现。基因编辑疗法CRISPR/Cas9可直接靶向cccDNA而发挥抗病毒作用,具有完全消除HBV的潜力,但目前仍处于临床前研究阶段。

增强靶向cccDNA的CRISPR/Cas9的抗病毒疗效

在AASLD 2022摘要中发表的一项研究结果表明,通过抑制非同源末端连接(NHEJ)介导的DNA修复机制可以增强靶向cccDNA的CRISPR/Cas9的抗病毒效果。

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研究方法

研究人员设计了靶向HBV基因组的gRNA(HBV-gRNA)和非靶向HBV或人类基因组的对照gRNA(Cont-gRNA),将串联Cas9和HBV-gRNA(或Cont-gRNA)的慢病毒表达载体(HBV-gRNA/Cas9或Cont-gRNA/Cas9)转入感染HBV 19天的原代人肝细胞(PHHs)中。诱导表达Cas9的HBV易感细胞(HepG2-hNTCP-iCas9)用单个HBV-gRNA或Cont-gRNA慢病毒载体进行转染。HBV感染4天后,用多西环素(DOX)诱导Cas9表达。进一步用HBV治疗或DNA合成/修复途径相关药物处理这些细胞,并检测其在CRISPR/cas9介导的抗HBV治疗中的作用。

研究结果

HBV-gRNA转染降低了HepG2-hNTCP-iCas9细胞上清中HBV DNA和HBsAg水平,以及细胞内pgRNA和cccDNA水平;同样,HBV-gRNA/Cas9转染降低了PHHs上清中HBV DNA和HBsAg水平以及细胞内pgRNA和cccDNA水平。CRISPR/Cas9治疗不激活先天免疫系统。

恩替卡韦、干扰素α、Bay41-4109(衣壳组装调节剂)不改变CRISPR/Cas9对HepG2-hNTCP-iCas9细胞的治疗效果。作用于DNA合成/修复机制的药物中,CD437(DNA合成抑制剂)也不改变CRISPR/Cas9对HepG2-hNTCP-iCas9细胞的治疗效果,而奥拉帕尼(PARP抑制剂)显著增强了CRISPR/Cas9治疗的抗病毒疗效。抑制BRCA(对同源重组至关重要)不改变CRISPR/Cas9的治疗效果,但抑制PARP2或HPF1(参与DNA双链断裂修复的初始步骤),以及LIG4(对NHEJ至关重要,NHEJ是一种特殊的DNA双链断裂修复机制)显著增强了CRISPR/Cas9的抗病毒疗效。

研究结论

奥拉帕尼抑制NHEJ介导的DNA修复机制增强了靶向HBV基因组的CRISPR/Cas9的治疗效果。

肝霖君有话说

基因编辑CRISPR/Cas9技术提供了完全治愈慢乙肝的可能,但由于基因编辑效率、脱靶等方面原因,单靠CRISPR/Cas9完全消除HBV是比较困难的。本文研究显示经抑制NHEJ介导的DNA修复增强了CRISPR/Cas9的功效,这种新型组合疗法可能有助于基因编辑技术完全消除HBV的早日实现。

参考文献:

Murai K, Kodama T, Hikita H, et al. Olaparib enhances the anti-viral effect of CRISPR/Cas9 therapy targeting HBV genome via NHEJ-mediated DNA repair machinery. AASLD2022. Abstracts (1166).

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