随着旨在实现HBV治愈新疗法的不断研究发展,量化控制或清除HBV感染肝细胞的负担至关重要。先前的研究数据表明,抗病毒治疗期间cccDNA的转录受到调控,约翰·霍普金斯大学研究人员在一项纵向研究中直接检验了这一假设。

研究招募了5名来自乙型肝炎研究网络的HIV-HBV合并感染者作为受试者,他们的肝活检配对时间相差约4年。使用单细胞激光捕获显微切割术(scLCM),研究人员从每次肝活检中分离出数百个单肝细胞,并分别提取RNA和DNA。 研究使用液滴数字PCR(ddPCR)来定量每个肝细胞中的cccDNA,基因组前RNA(pgRNA)和总HBV DNA。

在这五名受试者中,三名受试者在第一次活检时并未接受抗HBV治疗,但此后不久就开始抗病毒治疗。在第二次活检时,他们的血浆HBV DNA下降> 6 log IU / ml。在两次活检时,1/5名受试者间断地依赖于抗病毒药物抑制病毒复制治疗,两次活检之间 HBV DNA下降约1 log IU / ml(10 ^ 4至10 ^ 3 IU / ml)。第五位患者在两次活检时均接受抗HBV治疗,两次活检中均未检测到HBV DNA。

在第一次活检时感染还不受控制的三名个体中,> 90%的肝细胞被感染,并在治疗后下降至?30%,这一比例与先前对> 7年治疗个体的数据一致。在个体HBV病毒形式中,三位个体在活检之间pgRNA的下降值最大,平均水平范围从第一次活检的53-1254 cp /cell到第二次活检的0.2-36.9 cp /cell。

在第一次活检时,这三个个体的感染细胞中cccDNA的平均水平在3.4-3.5 cp /细胞之间,第二次活检时在2.8-3.4 cp /cell之间。转录沉默的肝细胞定义为cccDNA +和pgRNA阴性,这三名受试者从活检1增加到活检2。

在两次活检之间仍然无法检测到的人中,在两次活检之间转录沉默细胞的数量从1.6%增加到7.8%,最大pgRNA从78.4减少到18.7,而pgRNA阳性的细胞比例相对稳定(分别为15.5%和 14.4%)。

在一个下降1 log IU / ml的个体中,两个时间点均有超过90%的肝细胞感染,所有病毒形式的水平均保持恒定,并且在两次活检中均没有转录沉默细胞。

总之,大多数肝细胞是在不受控制的HBV感染期间感染的,经过多年的核苷(酸)类似物治疗后,可将其降至约30%的水平。通过治疗,HBV viroscape是动态的,并且HBV核酸的数量减少。

但是,该项研究证实,即使无法检测到HBV DNA,也有相当一部分被HBV感染的肝细胞是转录沉默的,并且通常随着治疗时间的延长而增加。

这些发现表明,HBV的抗病毒治疗导致cccDNA的转录调控。 因此,需要进一步的工作来理解转录沉默的机制。此外,作用机理依赖于HBV转录的新兴疗法可能需要支持这些细胞中重新激活转录的策略。(更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号)!

信息来源HepDART 2019大会论文集:Single hepatocyte molecular analysis of HBV from paired biopsies in HIV-HBV coinfection


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